細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

HUCCT1人膽管癌細(xì)胞

商品屬性

商品介紹

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長培養(yǎng)基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

年齡（性別） 男性；56歲

組織來源 膽管，腹水轉(zhuǎn)移

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肝膽癌細(xì)胞

生物安全等級 BSL-1

倍增時間 ~55 hours

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

CSNK2A1 Protein Human 重組人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

EDEM2重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

EDEM2重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Human 重組人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

小鼠尿微量白蛋白(ALB)檢測試劑盒 96T/48T

Rat parathyroid hormone related protein (PTHrP) ELISA Kit 大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)檢測試劑盒

Humandynorphin,DynELISAKit 人強啡肽(Dyn)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3檢測試劑盒人25羥基3(25(OH)D3/25HVD3)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母纖維素酶(cellulase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit小鼠載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

HUCCT1人膽管癌細(xì)胞小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠(ypsin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠三葉因子1(TFF1)檢測試劑盒 ，英文名： TFF1 ELISA Kit

Mouse sex hormone binding globulin (SHBG) ELISA Kit 小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒

RatEndotheliallipase,ELELISAKit 大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHA(MouseHyaluronicacid)ELISAKit小鼠透明質(zhì)酸

細(xì)胞半胱蛋白酶-8(CASPASE-8)活性熒光定量檢測試劑盒20次

RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISAKit大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T