土壤酸性磷酸酶(S-ACP)試劑洗滌方法:
. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。
.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?0μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品00μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 00μl(在使用前5分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前5分鐘內(nèi)配制)00μl,加上覆膜,37℃溫育小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液00μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育5分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體
磷酸化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體
磷酸化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK抗體
磷酸化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK抗體
磷酸化雌激素受體α抗體
磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體
真核翻譯起始因子4B抗體
磷酸化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體
磷酸化上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體
磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體
表皮生長(zhǎng)因子受體5抗體
電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽/黃素蛋白抗體