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曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備

. DNA模板

2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．0×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶操作步驟 

．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

      0×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物（0pM）               2μl

       引物2（0PM）              2μl

       Taq酶（2U/μl）            μl

      DNA模板（50ng-μg/μl） μl

      加ddH2O至               50 μl

    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用00μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-0μl電泳檢測。