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　　Elisa試劑盒是將純化的ins抗體包入微孔板中制成固相載體。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、ins抗體和HRP標(biāo)記的親和元件依次加入微孔中，洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)為藍(lán)色，在酸的作用下轉(zhuǎn)為黃色。顏色的深度與樣品中的INS呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(值)，計(jì)算樣品濃度。
 

　　Elisa試劑盒的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)擴(kuò)展：
 

　　1.試劑的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
 

　　所有打開的試劑在2-8℃下保存，保質(zhì)期內(nèi)不允許過(guò)期。所有打開的試劑應(yīng)儲(chǔ)存在2-8℃。一旦微孔板的包裝打開，就需要重新密封。
 

　　2.樣品的準(zhǔn)備
 

　　將所有的試劑和所需要的板條在使用前平衡至室溫。
 

　　洗滌液：用1170ml的蒸餾水稀釋30ml濃縮的洗滌液，終得到的容積為1200ml，稀釋好的洗滌液在室溫下可穩(wěn)定存放兩個(gè)星期。
 

　　3.樣品的收集
 

　　此ELISA試劑盒可使用血清也可使用(只有肝素或檸檬酸鹽抗凝的血漿)血漿作為樣品。
 

　　不能使用明顯溶血﹑黃疸和脂血的樣品。
 

　　血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下離心分離血清。
 

　　血漿：將全血采集到含有抗凝劑的離心管，采集后立即離心分離。
 

　　4.樣品的儲(chǔ)存：
 

　　樣品蓋好蓋子后，可在實(shí)驗(yàn)前2-8℃下儲(chǔ)存5天，要更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，應(yīng)在-20℃下凍存。在開始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。
 

　　5.樣品的稀釋：
 

　　在初次試驗(yàn)中，如果樣品的濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)按照試驗(yàn)程序的規(guī)定將樣品稀釋10倍或100倍。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋度乘以此值。
 

　　例子：
 

　　a)按1：10稀釋：10μL的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)。
 

　　b)按1：100釋稀：10μL按a)稀釋的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)